{"id":386521,"date":"2024-10-23T14:00:00","date_gmt":"2024-10-23T12:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/medizinonline.com\/novos-conhecimentos-atraves-da-multi-omica-e-do-sistema-reporter-biotecnologico\/"},"modified":"2024-10-23T14:39:08","modified_gmt":"2024-10-23T12:39:08","slug":"novos-conhecimentos-atraves-da-multi-omica-e-do-sistema-reporter-biotecnologico","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/medizinonline.com\/pt-pt\/novos-conhecimentos-atraves-da-multi-omica-e-do-sistema-reporter-biotecnologico\/","title":{"rendered":"Novos conhecimentos atrav\u00e9s da multi-\u00f3mica e do sistema rep\u00f3rter biotecnol\u00f3gico"},"content":{"rendered":"\n

Os metabolitos presentes nas amostras de soro, urina e fezes podem identificar as pessoas com insufici\u00eancia hep\u00e1tica aguda e cr\u00f3nica entre os doentes com cirrose hep\u00e1tica aguda descompensada, servindo de base para medidas de diagn\u00f3stico e terap\u00eauticas precoces.\nEsta \u00e9 a conclus\u00e3o de um projeto de estudo atual.\nNum projeto de outra equipa de investiga\u00e7\u00e3o, o sistema rep\u00f3rter “EXSISERS” forneceu informa\u00e7\u00f5es interessantes sobre a relev\u00e2ncia do estado do p53 na peritonite bacteriana espont\u00e2nea, uma complica\u00e7\u00e3o infecciosa associada \u00e0 cirrose hep\u00e1tica. <\/strong><\/p>\n\n\n\n

A fibrose hep\u00e1tica avan\u00e7ada e a cirrose s\u00e3o resumidas como “doen\u00e7a hep\u00e1tica cr\u00f3nica avan\u00e7ada” (DHC).\nA doen\u00e7a hep\u00e1tica cr\u00f3nica avan\u00e7ada caracteriza-se por danos persistentes e cicatrizes crescentes no f\u00edgado.\nA fase final da fibrose hep\u00e1tica \u00e9 a cirrose hep\u00e1tica.\nOs doentes com cirrose com descompensa\u00e7\u00e3o aguda (DA) t\u00eam um risco acrescido de desenvolver insufici\u00eancia hep\u00e1tica aguda ou cr\u00f3nica (IAFC).\nA ACLF caracteriza-se pela fal\u00eancia de \u00f3rg\u00e3os extra-hep\u00e1ticos e pela inflama\u00e7\u00e3o sist\u00e9mica.\nA FHCA est\u00e1 associada a um risco grave de complica\u00e7\u00f5es infecciosas e a uma elevada mortalidade a curto prazo.\nA fim de melhorar o progn\u00f3stico dos doentes afectados, s\u00e3o necess\u00e1rias medidas de diagn\u00f3stico e terap\u00eauticas precoces na FCA [1].\nDechaumet et al.\napresentaram um projeto de investiga\u00e7\u00e3o no congresso da EASL deste ano, no qual foram identificadas assinaturas metabol\u00f3micas para diferenciar entre doentes com DA com ou sem ACLF.\n [2,3]Segue-se um resumo deste e de outro projeto de investiga\u00e7\u00e3o no dom\u00ednio das doen\u00e7as hep\u00e1ticas avan\u00e7adas. <\/p>\n\n

An\u00e1lise dos dados da coorte MUCOSA-PREDICT <\/h3>\n\n

A totalidade das subst\u00e2ncias de baixo peso molecular (metabolitos) \u00e9 designada por metaboloma.\nO metaboloma pode ser medido, por exemplo, por cromatografia, espetrometria de massa ou espetroscopia de resson\u00e2ncia magn\u00e9tica nuclear.\n [10]O f\u00edgado \u00e9 um \u00f3rg\u00e3o metabolicamente muito ativo e as doen\u00e7as hep\u00e1ticas est\u00e3o a ser cada vez mais investigadas atrav\u00e9s de m\u00e9todos multi\u00f3micos (Fig. 1)<\/strong>.\nMoreau et al.\nrelataram em 2020 no Journal of Hepatology que foram capazes de identificar uma impress\u00e3o digital espec\u00edfica da ACLF de 38 metabolitos no sangue utilizando uma abordagem multi\u00f3mica em amostras de tecido, que se correlaciona com a inflama\u00e7\u00e3o sist\u00e9mica e actua como um indicador de disfun\u00e7\u00e3o mitocondrial em \u00f3rg\u00e3os perif\u00e9ricos [4]. <\/p>\n

\n
\"\"<\/a><\/figure>\n<\/div>\n

Objectivos e metodologia do estudo: <\/strong>O projeto de Dechaumet et al.\nteve como objectivos,\n(i) investigar se a an\u00e1lise de metabolitos em amostras de urina e fezes tem valor acrescentado para a carateriza\u00e7\u00e3o do metaboloma em doentes cirr\u00f3ticos descompensados e\n(ii) avaliar de que forma a metabol\u00f3mica multi-matriz contribui para melhorar a estratifica\u00e7\u00e3o dos doentes com cirrose descompensada [2].\nPara tal, os investigadores analisaram amostras de soro, urina e fezes da coorte MUCOSA-PREDICT, na qual est\u00e3o a ser acompanhados 93 doentes cirr\u00f3ticos com descompensa\u00e7\u00e3o aguda, utilizando cromatografia l\u00edquida acoplada a espetrometria de massa de alta resolu\u00e7\u00e3o.\nFoi detectado e identificado um total de 402 metabolitos nas tr\u00eas matrizes biol\u00f3gicas. <\/p>\n\n

Resultados: <\/strong>O maior n\u00famero de metabolitos cujas concentra\u00e7\u00f5es s\u00e3o influenciadas pela ACLF foi observado em amostras de soro [2].\nCuriosamente, as concentra\u00e7\u00f5es de alguns metabolitos na urina e nas fezes que n\u00e3o foram detectadas no soro tamb\u00e9m foram influenciadas pelo ACLF.\nNo entanto, as an\u00e1lises da curva ROC realizadas para as assinaturas metabol\u00f3micas em matrizes simples ou combinadas mostraram que a assinatura do soro teve o melhor desempenho na discrimina\u00e7\u00e3o entre a DA e o ACLF.\nTrata-se de uma descoberta clinicamente relevante, uma vez que ambas as doen\u00e7as se sobrep\u00f5em em casos individuais, mas s\u00e3o entidades diferentes em termos de fisiopatologia e terapia. <\/p>\n\n

Aplica\u00e7\u00e3o do sistema de informa\u00e7\u00e3o “EXSISERS<\/h3>\n\n

O eixo intestino-f\u00edgado descreve as diversas intera\u00e7\u00f5es entre o intestino e o f\u00edgado, incluindo a troca de componentes celulares e moleculares, e \u00e9 de import\u00e2ncia central para a regula\u00e7\u00e3o de processos (pato)fisiol\u00f3gicos essenciais.\nOs doentes com cirrose hep\u00e1tica t\u00eam uma espessura reduzida da mucosa, o que facilita o contacto direto das bact\u00e9rias com as c\u00e9lulas epiteliais e a degrada\u00e7\u00e3o dos compostos celulares [5].\nA transloca\u00e7\u00e3o bacteriana \u00e9 considerada um passo crucial na patog\u00e9nese das infec\u00e7\u00f5es bacterianas [6].\nPor exemplo, a transloca\u00e7\u00e3o de bact\u00e9rias intestinais para os g\u00e2nglios linf\u00e1ticos mesent\u00e9ricos \u00e9 um evento chave na peritonite bacteriana espont\u00e2nea.\nA peritonite bacteriana espont\u00e2nea** \u00e9 uma inflama\u00e7\u00e3o do l\u00edquido asc\u00edtico que ocorre com particular frequ\u00eancia na cirrose hep\u00e1tica e pode ter consequ\u00eancias graves. <\/p>\n\n

[11]** As bact\u00e9rias mais comuns que causam peritonite bacteriana espont\u00e2nea s\u00e3o a Escherichia coli Gram-negativa e a Klebsiella pneumoniae e o Streptococcus pneumoniae Gram-positivo.<\/em><\/p>\n\n

Objectivos e metodologia do estudo: <\/strong>De acordo com Ernst et al.\no stress celular desencadeado pelo contacto direto com as bact\u00e9rias afecta a fam\u00edlia p53 de factores de transcri\u00e7\u00e3o, que actuam como reguladores-chave do ciclo celular, dos mecanismos de repara\u00e7\u00e3o e da morte celular (apoptose) [3].\nNa sua forma de tipo selvagem, o p53 (wtp53) actua como um supressor tumoral central [7].\nAs prote\u00ednas hom\u00f3logas, estrutural e funcionalmente, p63 e p73 est\u00e3o inclu\u00eddas na fam\u00edlia p53 de factores de transcri\u00e7\u00e3o.\nA fun\u00e7\u00e3o da p53 est\u00e1 alterada num grande n\u00famero de tumores (muta\u00e7\u00f5es TP53).\nNo seu estudo, Ernst et al.\ninvestigaram os efeitos da bact\u00e9ria da ascite na express\u00e3o das isoformas$ do<\/sup> p53 em rela\u00e7\u00e3o \u00e0 indu\u00e7\u00e3o da morte celular em c\u00e9lulas epiteliais.\nAplicaram um novo sistema rep\u00f3rter biotecnol\u00f3gico [3].\nO sistema rep\u00f3rter denominado EXSISERS pode monitorizar a express\u00e3o de isoformas ao longo do tempo em c\u00e9lulas vivas [8]. <\/p>\n\n

$<\/sup> As isoformas s\u00e3o variantes de prote\u00ednas que surgem a partir de um \u00fanico gene.<\/em><\/p>\n\n

Foram integrados tr\u00eas sistemas rep\u00f3rteres de luciferase inte\u00ednos espec\u00edficos do ex\u00e3o (EXSISERS) nos ex\u00f5es 2, 4 e 7 do gene TP53.\nAs inte\u00ednas clivadas permitem a clivagem da enzima luciferase do polipept\u00eddeo p53, mantendo a integridade estrutural das isoformas do p53 [9].\nEste m\u00e9todo pode ser utilizado para quantificar com precis\u00e3o os r\u00e1cios das isoformas da prote\u00edna p53 a n\u00edvel celular.\nAs c\u00e9lulas HCT116-EXISERS foram co-cultivadas com Escherichia coli <\/em>derivada de doentes e foram medidos os tr\u00eas principais grupos de isoformas de p53 – p53 indutor de paragem do ciclo celular de comprimento total, \u039440p53 indutor de morte celular, \u0394133p53\/\u0394160p53 pr\u00f3-proliferativo.\nAo mesmo tempo, a morte celular induzida por bact\u00e9rias foi quantificada em c\u00e9lulas HCT116 p53 de tipo selvagem e p53 knockout.\nA microscopia eletr\u00f3nica foi utilizada para determinar o tipo de morte celular. <\/p>\n\n

Resultados: <\/strong>A co-cultura de bact\u00e9rias derivadas de doentes com c\u00e9lulas HCT116-EXISERS levou inicialmente a um aumento da produ\u00e7\u00e3o da isoforma p53 indutora de morte celular \u039440p53 em 15 minutos [3].\nSeguiu-se uma diminui\u00e7\u00e3o das isoformas pr\u00f3-proliferativas de p53 \u0394133p53\/\u0394160p53.\nAo mesmo tempo, foi observada apoptose em resposta ao contacto bacteriano, que mostrou carater\u00edsticas morfol\u00f3gicas de paraptose, incluindo incha\u00e7o mitocondrial e vacuoliza\u00e7\u00e3o citoplasm\u00e1tica.\nParalelamente \u00e0s altera\u00e7\u00f5es morfol\u00f3gicas observadas, a citometria de fluxo confirmou danos nas mitoc\u00f4ndrias e na membrana plasm\u00e1tica.\nO conhecido inibidor da paraptose acinomicina D bloqueou eficazmente a morte celular induzida por bact\u00e9rias.\nDe acordo com a indu\u00e7\u00e3o medida da isoforma \u039440p53, a indu\u00e7\u00e3o da morte celular foi significativamente atrasada por um knockout p53 mediado por CRISPR\/Cas9. <\/p>\n\n

Resumo<\/strong><\/td><\/tr>
Na cirrose hep\u00e1tica com descompensa\u00e7\u00e3o aguda (DA), o risco de desenvolver insufici\u00eancia hep\u00e1tica aguda ou cr\u00f3nica (IAFC) \u00e9 maior.\nNo estudo de Dechaumet et al.\ndemonstrou que as assinaturas metab\u00f3licas do sangue, mas tamb\u00e9m da urina e das fezes, diferenciam os doentes com DA com e sem ACLF.\nOs dados obtidos a partir do compartimento sangu\u00edneo parecem fornecer o melhor desempenho de estratifica\u00e7\u00e3o. <\/td><\/tr>
Em doentes com cirrose hep\u00e1tica, a transloca\u00e7\u00e3o bacteriana ocorre devido a uma integridade epitelial deficiente.\nAs respostas celulares ao stress bacteriano s\u00e3o reguladas por isoformas espec\u00edficas de p53.\nO estudo de Ernst et al.\nmostra que o estado da p53 exerce uma influ\u00eancia decisiva na suscetibilidade \u00e0 paraptose.\nA indu\u00e7\u00e3o ou estabiliza\u00e7\u00e3o de isoformas espec\u00edficas de p53 poderia, por conseguinte, representar uma op\u00e7\u00e3o terap\u00eautica para o tratamento da peritonite bacteriana espont\u00e2nea. <\/td><\/tr>
para [2,3]<\/em><\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n

Congresso: Congresso EASL 2024<\/em><\/p>\n\n

Literatura:<\/p>\n\n

    \n
  1. H\u00fcbener P, Braun G, Fuhrmann V: Med Klin Intensivmed Notfmed 2018; 113(8): 649-657.<\/li>\n\n\n\n
  2. Dechaumet S, et al: Multi-compartment metabolomics for stratifying cirrhotic patients with acute decompensation, WED-083, Congresso EASL, Mil\u00e3o, 5-8 de junho de 2024.<\/li>\n\n\n\n
  3. Ernst M, et al: Liver cirrhosis and epithelial damage – The gut-liver axis in spontaneous bacterial peritonitis and its modulation by p53, WED-106, EASL Congress, Milan, 5-8 June 2024.<\/li>\n\n\n\n
  4. Moreau R, et al: J Hepatol 2020; 72: 688-701.<\/li>\n\n\n\n
  5. Haderer, M. et al: Gut 2022; 71: 580-592. <\/li>\n\n\n\n
  6. Rayes N: Experimental and clinical investigation of the influence of pre- and probiotics on bacterial translocation and postperative infections after abdominal surgery, tese de habilita\u00e7\u00e3o, 2004, https:\/\/core.ac.uk,<\/a>(\u00faltimo acesso em 27\/08\/2024) <\/li>\n\n\n\n
  7. Weilbacher A: The role of p53 status for the sensitivity of tumours to different p53 activators, Disserta\u00e7\u00e3o, 2017, https:\/\/elib.uni-stuttgart.de,<\/a>(\u00faltimo acesso em 27.08.2024) .<\/a><\/li>\n\n\n\n
  8. “Novas prote\u00ednas de design tornam as isoformas vis\u00edveis de forma n\u00e3o invasiva”, Helmholtz Munique, 04.06.2021. <\/li>\n\n\n\n
  9. Truong, D-JJ, et al: Non-Invasive and High Throughput Interrogation of Exon-Specific Isoform Expression [Interroga\u00e7\u00e3o n\u00e3o invasiva e de elevado rendimento da express\u00e3o de isoformas espec\u00edficas do ex\u00e3o]. Nature Cell Biology 2021, doi:10.1038\/s41556-021-00678-x<\/li>\n\n\n\n
  10. Raja G, et al.: Recent Advances of Microbiome-Associated Metabolomics Profiling in Liver Disease: Principles, Mechanisms, and Applications. International Journal of Molecular Sciences 2021; 22(3): 1160. www.mdpi.com\/1422-0067\/22\/3\/1160#<\/a>, (letzter Abruf 27.08.2024)\u00a0<\/li>\n\n\n\n
  11. “Spontaneous bacterial peritonitis (SBP)”, Danielle Tholey, MD, www.msdmanuals.com\/de,<\/a>(\u00faltimo acesso em 27\/08\/2024).<\/li>\n<\/ol>\n\n

    <\/p>\n\n

    HAUSARZT PRAXIS 2024; 19(9): 38-39 (publicado em 18.9.24, antes da impress\u00e3o)<\/em><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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