Gli ultimi progressi nel campo dell’ematologia sono stati al centro del meeting annuale di quest’anno dell’ Associazione Europea di Ematologia a Madrid. Gli esperti hanno discusso i dati della ricerca su varie malattie del sangue, degli organi ematopoietici, dei linfonodi e del sistema linfatico.
La vitamina C (VitC) è un cofattore per l’importante regolatore epigenetico TET2. Tuttavia, i pazienti con tumore ematologico spesso soffrono di carenza di vitamina C. Le alterazioni epigenetiche acquisite sono un segno distintivo dei tumori mieloidi e le mutazioni di perdita di TET2 sono una causa comune di leucemogenesi. Pertanto, l’integrazione di VitC potrebbe essere una strategia terapeutica interessante per i pazienti con tumori mieloidi in fase iniziale e malattie precursori. Pertanto, è necessario verificare se l’integrazione orale di VitC sia sicura e possa alterare le caratteristiche molecolari e cliniche della malattia e gli esiti nei pazienti con neoplasie mieloidi a basso rischio – ossia neoplasie mielodisplastiche a basso rischio (MDS; punteggio IPSS-R ≤3) e MDS/neoplasie mieloproliferative (MDS/MPN) – e la malattia precursore citopenia clonale di significato indeterminato (CCUS) [1]. L’endpoint primario dello studio di Fase II, randomizzato e controllato con placebo, era la variazione della frequenza allelica delle mutazioni somatiche nelle cellule mononucleari del midollo osseo dal basale alla fine del trattamento.
Tra il 2017 e il 2022, 55 pazienti sono stati randomizzati al gruppo VitC e 54 pazienti al gruppo placebo in quattro centri. La concentrazione di VitC nel plasma del sangue periferico era insufficiente (<50 μmol/L) nel 57% dei partecipanti allo studio all’inizio dello studio. Nel gruppo VitC, c’è stato un aumento significativo della concentrazione plasmatica mediana di VitC da 45,85 μmol/L al basale a 81,90 μmol/L dopo 12 mesi, mentre non sono stati osservati cambiamenti statisticamente significativi nella concentrazione di VitC nel gruppo placebo. Un totale di 31 SAE si è verificato in 15 dei 55 pazienti (27%) del gruppo VitC e 57 SAE in 23 dei 54 pazienti (43%) del gruppo placebo. Al termine dello studio, il tempo mediano di follow-up era di 33,5 mesi (range 0-70,0 mesi) e si sono verificati 35 decessi (gruppo vitC, n=11; gruppo placebo, n=24). La OS mediana non è stata raggiunta nel gruppo vitC ed è stata di 42,2 mesi nel gruppo placebo. Nell’analisi multivariabile, il trattamento orale con vitC era anche associato in modo statisticamente significativo a una OS più lunga rispetto al placebo.
Aumento dell’emoglobina dovuto a NFKB1
I tibetani, gli etiopi e gli andini sono stati studiati in dettaglio per i loro adattamenti genetici evolutivi alla mancanza di ossigeno ad alta quota. Ad alta quota, i tibetani e gli etiopi hanno livelli di emoglobina (Hb) paragonabili a quelli del livello del mare, mentre gli andini hanno livelli di Hb più alti degli europei che vivono alla stessa altitudine. La selezione dei tibetani di due varianti genetiche nei geni del fattore inducibile dell’ipossia (HIF), EPAS1 (HIF-2a) e EGLN1 (prolilidrossilasi 2), è già stata trovata in correlazione con i loro livelli di Hb più bassi (Science 2010, Nat Gen 2014). Un precedente studio di sequenziamento dell’intero genoma ha identificato forti segnali di selezione nei geni BRINP3, NOS2 e TBX5, associati alla funzione e allo sviluppo cardiovascolare, ma non è riuscito a spiegare i livelli elevati di Hb. L’analisi del trascrittoma dovrebbe ora essere utilizzata per identificare le firme genetiche per i livelli elevati di Hb in Aymara [2].
Negli Aymara sono stati identificati un totale di 2601 geni espressi in modo differenziato e 1922 geni di splicing, associati a vie di segnalazione immunitarie, infiammatorie e legate all’ipossia. I loro regolatori cis-genetici sono stati analizzati sotto forma di tratti di espressione quantitativa e tratti di splicing quantitativo (sQTL). Sono stati trovati trascritti nuovi con esone 4 o 5 saltato o entrambi gli esoni in NFKB1 (AS-NFKB1), una parte chiave della via di segnalazione NF-kB che contribuisce alla soppressione della via infiammatoria e all’attivazione di HIFs. AS-NFKB1 privo dell’esone 4 o degli esoni 4 e 5 non viene convertito in proteina, mentre AS-NFKB1 con l’esone 5 saltato viene convertito in proteina, ma è impropriamente convertito in p50 e non è in grado di traslocare correttamente nel nucleo. I trascritti AS-NFKB1 causano quindi una perdita parziale della funzione canonica di NFKB1 come soppressore di NF-kB. Questi trascritti AS-NFKB1 sono stati associati a 5 sQTL e sono stati arricchiti in Aymara rispetto ad altre popolazioni. Tra questi 5 sQTL, rs230511 è stato il polimorfismo a singolo nucleotide (SNP) più frequentemente selezionato in Aymara. I livelli di trascrizione di AS-NFKB1 e l’allele T (allele arricchito in Aymara) di rs230511 si sono correlati positivamente con l’Hb elevato in Aymara. Sono anche correlati con i livelli di trascrizione e di proteina dei geni infiammatori regolati da NF-kB, come l’interferone gamma e l’interleuchina 6. Mentre l’aumento dell’infiammazione sopprime l’eritropoiesi attraverso l’upregulation dell’epcidina, che è anche correlata con i livelli di trascrizione di AS-NFKB1, AS-NFKB1 è stato trovato correlato anche con una marcata upregulation di molti geni regolati da HIF. Gli HIF sono i regolatori principali dell’aumento dell’eritropoiesi, che spiegano collettivamente l’eritrocitosi Aymara. Questi risultati suggeriscono che l’aumento dell’attività trascrizionale HIF che porta all’eritrocitosi Aymara supera la soppressione dell’eritropoiesi da parte dell’aumento dell’infiammazione modulata da AS-NFKB1.
Dinamica del proteoma nelle CSE
La descrizione dei driver propri ed esterni dell’autorinnovamento delle cellule staminali ematopoietiche (HSC) è di importanza cruciale per migliorare l’espansione ex vivo delle HSC e per una migliore comprensione della biologia delle cellule leucemiche. Le mutazioni con perdita di funzione nel regolatore epigenetico TET2 sono frequentemente osservate nelle neoplasie mieloproliferative (MPN). Si presume che conferiscano un maggiore potenziale di auto-rinnovamento alle HSC, che porta alla crescita clonale delle cellule mutate. A livello trascrizionale, le mutazioni Tet2 sono associate a un’espressione genica alterata nelle HSC di topo. Tuttavia, ad oggi sono stati identificati relativamente pochi geni responsabili dello sviluppo e della progressione della MPN e gli approcci trascrittomici hanno avuto un successo limitato nell’identificare nuovi bersagli terapeutici. Mentre sono stati sviluppati numerosi strumenti per studiare il genoma e il trascrittoma a risoluzione monocellulare, la scarsità di CSE nei tessuti di topo e umani ha impedito una caratterizzazione globale del proteoma cellulare ed extracellulare delle CSE. I progressi paralleli nell’espansione ex vivo delle CSE e nella proteomica a basso input ci portano alla soglia di rompere questa barriera decennale e di ampliare significativamente la nostra comprensione dei fattori di auto-rinnovamento nell’ematopoiesi normale e maligna.
L’obiettivo era quello di eseguire una profilazione proteomica delle CSE normali e con deficit di Tet2, appena isolate o espanse ex vivo, e di caratterizzare i fattori solubili nel microambiente cellulare in vivo e in coltura, per generare una mappa molecolare completa dei fattori intra- ed extracellulari di auto-rinnovamento nelle CSE normali e premaligne [3].
Sono stati applicati protocolli di preparazione dei campioni miniaturizzati e multiplexati, in combinazione con la proteomica quantitativa basata sulla spettrometria di massa per confrontare le CSE normali e quelle con deficit di Tet2, e l’acquisizione indipendente dai dati (DIA)-MS per caratterizzare l’ambiente extracellulare delle CSE normali e premaligne in vivo e durante l’espansione ex vivo. Sia il proteoma cellulare che quello secreto hanno dimostrato di stratificare accuratamente le CSE in base alla loro potenza funzionale e allo stato mutazionale, identificando nuovi componenti molecolari non catturati dalle analisi trascrittomiche. Sul fronte della pre-leucemia, è stato osservato che le CSE con deficit di Tet2 presentano un’espressione alterata delle proteine della matrice extracellulare (ECM) e che l’interazione con queste proteine nelle nicchie artificiali influenza la funzione cellulare. Le analisi proteomiche extracellulari mostrano anche che le cellule con deficit di Tet2 creano un microambiente pro-infiammatorio e pro-trombotico anche negli animali giovani e asintomatici. Nei test di espansione delle CSE, la proteomica identifica la necessità di percorsi di riparazione del DNA intatti come componenti chiave dei cloni di CSE in grado di auto-rinnovarsi in modo estensivo rispetto alle colture di espansione non riuscite. Coerentemente con questo, i saggi funzionali mostrano che l’enzima di riparazione del DNA Parp1 e la demetilasi m6A Fto svolgono un ruolo chiave nell’espansione ex vivo delle CSE. L’analisi del secretoma delle colture non riuscite mostra anche che le proteine dei mastociti predicono il fallimento dell’espansione delle CSE trapiantabili, mentre l’analisi del secretoma dei cloni che possono essere trapiantati in vivo a lungo termine indica un’elevata concentrazione di emoglobina come indicatore del successo della coltura.
Mutazioni TP53 nella LLC
Le mutazioni somatiche di TP53 sono comuni nel cancro e determinano la progressione della malattia e la resistenza alla terapia. Nella leucemia linfatica cronica (LLC), la mutazione di TP53 porta a una scarsa risposta e a una sopravvivenza più breve. Tuttavia, non è chiaro il significato prognostico delle varie mutazioni, delle dimensioni del clone e della contemporanea comparsa di altre alterazioni genetiche in presenza di terapie diverse. Lo scopo di uno studio è stato quindi quello di descrivere il panorama delle mutazioni TP53 nella LLC e di indagare il loro significato prognostico negli studi clinici, tenendo conto dei fattori di rischio genetici e del tipo di trattamento [4].
Sono state identificate 1824 alterazioni di TP53 in 1368 pazienti, inclusi 336 pazienti nella coorte di efficacia. Le mutazioni di TP53 erano varianti a singolo nucleotide (78%), delezioni (12%), mutazioni del sito di splice (6%) e altre 4%.I pazienti mutati in TP53 presentavano una (77%), due (15%) o più varianti (8%). U-IGHV era predominante nel 78% dei casi mutati in TP53, del (17p) nel 51%. A un tempo mediano di osservazione di 65,7 mesi, i pazienti TP53-mutati della coorte di efficacia presentavano una PFS e una OS inferiori rispetto ai pazienti wild type. Questi effetti negativi sono stati osservati per le varianti all’interno e all’esterno del dominio di legame del DNA. Le mutazioni con guadagno/perdita di funzione, le mutazioni del sito di splice o nonsense e le mutazioni missense con previsione patogenetica erano ugualmente associate a una sopravvivenza più breve. Al contrario, le varianti missense di significato sconosciuto e le mutazioni che portano a una parziale attività di p53 non hanno peggiorato la prognosi rispetto a TP53 wild type. Le mutazioni minori di TP53 (proporzione allelica della variante 10%) sono state associate a una OS più breve, ma non a una PFS più breve, il che suggerisce un’influenza sulla terapia successiva.
Congresso: European Hematology Association (EHA)
Letteratura:
- Mikkelsen SU, et al: SUPPLEMENTAZIONE DI VITAMINA C IN PAZIENTI CON CIPITOPENIA CLONALE DI SIGNIFICATO INDETERMINATO O MALIGNANZE MIELOIDI A BASSO RISCHIO: RISULTATI DELL’EVI-2, UNO STUDIO DI FASE 2 RANDOMIZZATO, CONTROLLATO DA PLACEBO. Abstract LB3444, Associazione Europea di Ematologia (EHA), 13-16 giugno 2024 Madrid.
- Song J, et al: L’EMOGLOBINA ELEVATA DEGLI AYMARAS ANDEANI È CAUSATA DA UN NFKB1 ALTERNATIVAMENTE SPLICATO. Abstract LB3441, Associazione Europea di Ematologia (EHA), 13-16 giugno 2024 Madrid.
- Yassinskaya M , et al: DINAMICA DEI PROTEOMI INTRA- ED EXTRACELLULARI DURANTE L’ESPANSIONE DI CELLULE STAMINALI EMATOPOIETICHE NORMALI E MALIGNE. Abstract LB3443, Associazione Europea di Ematologia (EHA), 13-16 giugno 2024 Madrid.
- Bertossi C, et al: IL PAESAGGIO DELLE MUTAZIONI DI TP53 E IL LORO IMPATTO PROGNOSTICO NELLA LEUCEMIA LINFOCITICA CRONICA. Abstract S101, Associazione Europea di Ematologia (EHA), 13-16 giugno 2024 Madrid.
InFo ONKOLOGIE & HÄMATOLOGIE 2024; 12(4): 28–29