Os últimos avanços no domínio da hematologia estiveram no centro da reunião anual da Associação Europeia de Hematologia, realizada este ano em Madrid. Os especialistas discutiram dados de investigação sobre várias doenças do sangue, dos órgãos hematopoiéticos, dos gânglios linfáticos e do sistema linfático.
A vitamina C (VitC) é um co-fator para o importante regulador epigenético TET2. No entanto, os doentes com cancro hematológico sofrem frequentemente de deficiência de vitamina C. As alterações epigenéticas adquiridas são uma caraterística das doenças malignas mielóides e as mutações de perda de TET2 são uma causa comum de leucemogénese. Por conseguinte, a suplementação com VitC pode ser uma estratégia terapêutica atractiva para doentes com doenças malignas mielóides em fase inicial e doenças precursoras. Por conseguinte, deve ser investigado se a suplementação oral com VitC é segura e pode alterar as caraterísticas moleculares e clínicas da doença e os resultados em doentes com doenças malignas mielóides de baixo risco – ou seja, neoplasias mielodisplásicas de baixo risco (MDS; pontuação IPSS-R ≤3) e MDS/neoplasias mieloproliferativas (MDS/MPN) – e a doença precursora citopenia clonal de significado indeterminado (CCUS) [1]. O parâmetro de avaliação primário do estudo de Fase II aleatorizado e controlado por placebo foi a alteração da frequência alélica das mutações somáticas nas células mononucleares da medula óssea desde o início até ao fim do tratamento.
Entre 2017 e 2022, 55 pacientes foram randomizados para o grupo vitC e 54 pacientes para o grupo placebo em quatro centros. A concentração de VitC no plasma sanguíneo periférico era insuficiente (<50 μmol/L) em 57% dos participantes do estudo no início do estudo. No grupo VitC, registou-se um aumento significativo na concentração plasmática mediana de VitC de 45,85 μmol/L na linha de base para 81,90 μmol/L após 12 meses, enquanto não foram observadas alterações estatisticamente significativas na concentração de VitC no grupo placebo. Um total de 31 SAEs ocorreu em 15 de 55 pacientes (27%) no grupo VitC e 57 SAEs em 23 de 54 pacientes (43%) no grupo placebo. No final do estudo, o tempo mediano de acompanhamento foi de 33,5 meses (variação de 0-70,0 meses), e ocorreram 35 mortes (grupo vitC, n=11; grupo placebo, n=24). A mediana da OS não foi alcançada no grupo vitC e foi de 42,2 meses no grupo placebo. Na análise multivariada, o tratamento oral com vitC também foi estatisticamente associado a uma OS mais longa em comparação com o placebo.
Aumento da hemoglobina devido ao NFKB1
Os tibetanos, os etíopes e os andinos têm sido estudados em pormenor quanto às suas adaptações genéticas evolutivas à falta de oxigénio a grandes altitudes. A grande altitude, os tibetanos e os etíopes têm níveis de hemoglobina (Hb) comparáveis aos do nível do mar, enquanto os andinos têm níveis de Hb mais elevados do que os europeus que vivem à mesma altitude. Já se verificou que a seleção tibetana de duas variantes genéticas nos genes do fator induzido pela hipóxia (HIF), EPAS1 (HIF-2a) e EGLN1 (prolil hidroxilase 2), está correlacionada com os seus níveis mais baixos de Hb (Science 2010, Nat Gen 2014). Um estudo anterior de sequenciação do genoma completo identificou fortes sinais de seleção nos genes BRINP3, NOS2 e TBX5 que estavam associados à função e ao desenvolvimento cardiovasculares, mas não conseguiu explicar os níveis elevados de Hb. A análise do transcriptoma deve agora ser utilizada para identificar assinaturas genéticas para níveis elevados de Hb em Aymara [2].
Foi identificado um total de 2601 genes diferencialmente expressos e 1922 genes com splicing em Aymaras, que estavam associados a vias de sinalização imunes, inflamatórias e relacionadas com a hipoxia. Os seus reguladores cis-genéticos foram analisados sob a forma de traços de expressão quantitativa e traços de splicing quantitativo (sQTLs). Foram encontradas novas transcrições com o exão 4 ou 5 saltado ou com ambos os exões no NFKB1 (AS-NFKB1), uma parte essencial da via de sinalização do NF-kB que contribui para a supressão da via inflamatória e para a ativação dos HIFs. A AS-NFKB1 sem o exão 4 ou sem os exões 4 e 5 não é convertida em proteína, enquanto a AS-NFKB1 com o exão 5 saltado é convertida em proteína, mas é incorretamente convertida em p50 e não consegue translocar-se corretamente para o núcleo. As transcrições AS-NFKB1 causam assim uma perda parcial da função canónica do NFKB1 como supressor do NF-kB. Estes transcritos AS-NFKB1 foram associados a 5 sQTLs e foram enriquecidos em Aymara em comparação com outras populações. Entre estes 5 sQTLs, o rs230511 foi o polimorfismo de nucleótido único (SNP) mais frequentemente selecionado em Aymara. Os níveis de transcrição de AS-NFKB1 e o alelo T (alelo enriquecido em Aymara) de rs230511 correlacionaram-se positivamente com Hb elevada em Aymara. Também se correlacionaram com os níveis de transcrição e de proteína dos genes inflamatórios regulados pelo NF-kB, como o interferão gama e a interleucina 6. Embora o aumento da inflamação suprima a eritropoiese através da regulação positiva da hepcidina, que também se correlacionou com os níveis de transcrição do AS-NFKB1, verificou-se que o AS-NFKB1 também se correlaciona com a regulação positiva acentuada de muitos genes regulados pelo HIF. Os HIFs são os principais reguladores do aumento da eritropoiese, o que explica coletivamente a eritrocitose Aymara. Estes resultados sugerem que o aumento da atividade transcricional dos HIFs que conduz à eritrocitose Aymara supera a supressão da eritropoiese pelo aumento da inflamação modulada pelo AS-NFKB1.
Dinâmica do proteoma em HSC
A descrição dos factores próprios e externos da auto-renovação das células estaminais hematopoiéticas (HSC) é de importância crucial para melhorar a expansão ex vivo das HSC e para uma melhor compreensão da biologia das células leucémicas. As mutações de perda de função no regulador epigenético TET2 são frequentemente observadas nas neoplasias mieloproliferativas (NMP). Presume-se que estas mutações conferem um potencial de auto-renovação acrescido às HSCs, o que leva ao crescimento clonal das células mutadas. Ao nível transcricional, as mutações Tet2 estão associadas a uma expressão genética alterada nas HSCs de ratinho. No entanto, até à data, foram identificados relativamente poucos genes responsáveis pelo desenvolvimento e progressão das NMP, e as abordagens transcriptómicas tiveram um sucesso limitado na identificação de novos alvos terapêuticos. Embora tenham sido desenvolvidas numerosas ferramentas para estudar o genoma e o transcriptoma com resolução unicelular, a escassez de HSCs em tecidos de ratos e humanos impediu a caraterização global do proteoma celular e extracelular das HSCs. Avanços paralelos na expansão ex vivo de HSCs e na proteómica de baixo rendimento levam-nos ao limiar de quebrar esta barreira de décadas e de expandir significativamente a nossa compreensão dos factores de auto-renovação na hematopoiese normal e maligna.
O objetivo era realizar um perfil proteómico de HSCs normais e deficientes em Tet2 recentemente isoladas ou expandidas ex vivo e caraterizar factores solúveis no microambiente celular in vivo e em cultura para gerar um mapa molecular abrangente de factores de auto-renovação intra e extracelulares em HSCs normais e pré-malignas [3].
Foram aplicados protocolos miniaturizados e multiplexados de preparação de amostras em combinação com proteómica quantitativa baseada em espetrometria de massa para comparar HSCs normais e deficientes em Tet2, e aquisição independente de dados (DIA)-MS para caraterizar o ambiente extracelular de HSCs normais e pré-malignas in vivo e durante a expansão ex vivo. Foi demonstrado que tanto o proteoma celular como o proteoma segregado estratificam com precisão os HSC com base na sua potência funcional e estado mutacional, identificando novos componentes moleculares não captados em análises transcriptómicas. No que respeita à pré-leucemia, observou-se que as HSC deficientes em Tet2 apresentam uma expressão alterada de proteínas da matriz extracelular (ECM) e que a interação com estas proteínas em nichos artificiais influencia a função celular. As análises proteómicas extracelulares também mostram que as células deficientes em Tet2 criam um microambiente que é pró-inflamatório e pró-trombótico, mesmo em animais jovens e assintomáticos. Nos ensaios de expansão de HSC, a proteómica identifica a necessidade de vias de reparação do ADN intactas como componentes-chave dos clones de HSC capazes de uma auto-renovação extensiva em comparação com culturas de expansão mal sucedidas. Em consonância com este facto, os ensaios funcionais mostram que a enzima de reparação do ADN Parp1 e a desmetilase m6A Fto desempenham um papel fundamental na expansão ex vivo das HSC. A análise do secretoma de culturas mal sucedidas também mostra que as proteínas dos mastócitos predizem o fracasso da expansão de HSCs transplantáveis, enquanto a análise do secretoma de clones que podem ser transplantados in vivo a longo prazo indica uma concentração elevada de hemoglobina como indicador do sucesso da cultura.
Mutações TP53 na LLC
As mutações somáticas do gene TP53 são comuns no cancro e conduzem à progressão da doença e à resistência à terapêutica. Na leucemia linfocítica crónica (LLC), a mutação do TP53 conduz a uma má resposta e a uma sobrevivência mais curta. No entanto, não é claro o significado prognóstico das várias mutações, o tamanho do clone e a ocorrência simultânea de outras alterações genéticas sob diferentes terapêuticas. Por conseguinte, o objetivo de um estudo foi descrever o panorama das mutações do TP53 na LLC e investigar o seu significado prognóstico em ensaios clínicos, tendo em conta os factores de risco genéticos e o tipo de tratamento [4].
Foram identificadas 1824 alterações no TP53 em 1368 doentes, incluindo 336 doentes na coorte de eficácia. As mutações do TP53 eram variantes de nucleótido único (78%), deleções (12%), mutações no local de splice (6%) e outras 4%.Os doentes com mutações do TP53 tinham uma (77%), duas (15%) ou mais variantes (8%). A U-IGHV foi predominante em 78% dos casos com mutações no TP53 e a del(17p) em 51%. Num período de observação mediano de 65,7 meses, os doentes com mutações no TP53 da coorte de eficácia apresentaram uma PFS e uma OS inferiores às do tipo selvagem. Estes efeitos adversos foram observados para variantes dentro e fora do domínio de ligação ao ADN. As mutações de ganho/perda de função, as mutações no local de splice ou nonsense e as mutações missense com previsão patogénica foram igualmente associadas a uma sobrevivência mais curta. Em contrapartida, as variantes missense de significado desconhecido e as mutações que conduzem a uma atividade parcial do p53 não pioraram o prognóstico em comparação com o tipo selvagem do TP53. A s mutações menores do TP53(proporção de alelos da variante de 10%) foram associadas a uma OS mais curta, mas não a uma PFS mais curta, o que sugere uma influência na terapia subsequente.
Congresso: European Hematology Association (EHA)
Literatura:
- Mikkelsen SU, et al: SUPLEMENTAÇÃO DE VITAMINA C EM PACIENTES COM CITOPENIA CLONAL DE SIGNIFICÂNCIA INDETERMINADA OU MALIGNANCIAS Mielóides DE BAIXO RISCO: RESULTADOS DO EVI-2, UM ESTUDO DE FASE 2 RANDOMIZADO, CONTROLADO EM PLACEBO. Resumo LB3444, Associação Europeia de Hematologia (EHA), 13-16 de junho de 2024, Madrid.
- Song J, et al: HEMOGLOBINA ELEVADA DE AYMARAS ANDINAS É CAUSADA POR NFKB1 ALTERNATIVAMENTE SPLICADO. Resumo LB3441, Associação Europeia de Hematologia (EHA), 13-16 de junho de 2024, Madrid.
- Yassinskaya M , et al: INTRA- AND EXTRACELLULAR PROTEOME DYNAMICS DURING NORMAL AND MALIGNANT HEMATOPOIETIC STEM CELL EXPANSION. Resumo LB3443, Associação Europeia de Hematologia (EHA), 13-16 de junho de 2024, Madrid.
- Bertossi C, et al: O PAVILHÃO DE MUTAÇÕES TP53 E O SEU IMPACTO PROGNÓSTICO NA LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA. Resumo S101, Associação Europeia de Hematologia (EHA), 13-16 de junho de 2024, Madrid.
InFo ONKOLOGIE & HÄMATOLOGIE 2024; 12(4): 28–29
